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進口寨卡病毒IgM抗體檢測試劑（德(de)國IBL)

【產品名稱】

通用名稱：寨卡(ka)病毒(du)IgM檢測試(shi)劑盒（酶聯免疫法）

【產(chan)品規格】

96T/盒

【預期(qi)用途(tu)】

試劑盒可用于(yu)人血(xue)清和血(xue)漿（檸(ning)檬酸鹽）中寨卡病毒IgM抗體的定性檢測(ce)。

【檢測原理(li)】

試劑盒采(cai)用酶聯免疫(yi)法。微孔中(zhong)預(yu)包被有抗(kang)人IgG，用(yong)于結(jie)合樣(yang)(yang)品中相應的(de)抗(kang)體(ti)。洗(xi)板后，去除非結(jie)合的(de)樣(yang)(yang)品。再(zai)加入寨(zhai)(zhai)卡病(bing)毒原液(ye)，再(zai)次洗(xi)板后，再(zai)加入生物素(su)化的(de)寨(zhai)(zhai)卡病(bing)毒抗(kang)體(ti)。加入鏈霉親和素(su)標記結(jie)合物（酶聯物），與固相的(de)特(te)異性的(de)寨(zhai)(zhai)卡病(bing)毒合物結(jie)合。加入TMB底物液(ye)后，微孔中顯藍(lan)色。顯色的(de)強度(du)與病(bing)人樣(yang)(yang)品中寨(zhai)(zhai)卡病(bing)毒IgM抗體的量成正比。加入終止(zhi)液終止(zhi)酶反應(ying)，形成黃色終點產物(wu)。后在(zai)酶標儀處(chu)450 nm讀(du)數。

【檢測方(fang)法】

試劑(ji)準(zhun)備(bei)

試(shi)驗前，將所有試(shi)劑(ji)，樣品，質控品平衡至室溫(20~25℃)

寨卡病(bing)毒抗原(yuan)：

每瓶加入1mL稀釋(shi)洗(xi)滌液溶(rong)解(jie)，緩(huan)慢加入，室溫下靜(jing)置溫育15min，制(zhi)成(cheng)即用(yong)型抗(kang)原液(ye)。此抗(kang)原液(ye)在2~8 ℃可(ke)穩定保存(cun)1天。

洗(xi)滌液：

1個(ge)單位的濃(nong)縮洗滌液+19個(ge)單位的雙蒸水。

如：10mL濃縮洗滌液(ye)+190 mL雙蒸水。稀釋洗(xi)滌液(ye)在(zai)室(shi)溫下(xia)能穩(wen)定保存(cun)5天。開瓶后(hou)，濃縮(suo)的(de)洗(xi)滌液(ye)在(zai)2~8℃可穩定(ding)保存至(zhi)有效期.

檢測(ce)步驟

試驗(yan)(yan)前，仔細閱讀(du)說明(ming)書(shu)。嚴格執(zhi)行說明(ming)書(shu)要求才能得(de)到(dao)優質結果。如(ru)試驗(yan)(yan)使用(yong)自動洗(xi)板機，建議每孔350µL，洗板5次（如手(shou)工洗，則(ze)每孔300µL，洗板3次）。試驗前，確(que)定好樣(yang)品，質(zhi)控品的加樣(yang)布局方案。取所需板條置(zhi)于板架上。

至少設

1孔(kong)（如(ru)A1）         空白對照

1孔 (如B1)          陰性質控

2孔 (如C1+D1）      臨界質(zhi)控

1孔（如E1）         陽性質控(kong)

如覺得有必(bi)要(yao)，建(jian)議(yi)樣品(pin)和質控品(pin)都作(zuo)雙份檢測。

試驗應按同(tong)樣(yang)的(de)加樣(yang)順序加取(qu)試劑，避免不同(tong)的(de)時間間隔(ge)造成(cheng)誤差。

使用新的(de)一次性加(jia)樣(yang)槍頭，加(jia)各質控品(pin)，樣(yang)品(pin)

調節恒溫(wen)箱為(wei)37±1℃

• 加50µL質控品和稀釋樣品至相應各(ge)孔(kong)中，設A1作(zuo)為空白對照
• 封板紙蓋板
• 37 ± 1 ℃溫(wen)育1小(xiao)時±5分鐘
• 溫育后(hou)，移除封板紙，倒出微(wei)孔內液體，每孔用300µL稀釋洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)，洗(xi)(xi)板3次，避免洗(xi)(xi)滌(di)液(ye)相(xiang)互溢(yi)濺至其(qi)它微孔。每次洗(xi)(xi)板時，浸(jin)泡時間應大于5秒。后，在吸(xi)水紙上(shang)拍干，去(qu)除殘留液(ye)滴。

注意：洗(xi)滌步驟很關(guan)鍵。不(bu)充分的洗(xi)板，會(hui)導致(zhi)不(bu)精確或錯(cuo)誤上(shang)升的吸光度(du)值。

• 除空白對照孔（A1）外(wai)，加50µL基孔肯雅熱液(ye)抗(kang)原液(ye)至各孔，蓋板
• 室溫下(xia)溫育30分鐘
• 重(zhong)復步驟4
• 除空白對照孔（A1）外，加(jia)50µL 基孔(kong)肯雅熱液(ye)抗體(ti)液(ye)至各孔(kong)，蓋(gai)板
• 室(shi)溫下(xia)溫育(yu)30分鐘
• 重復步(bu)驟4
• 除空白(bai)對(dui)照(zhao)孔（A1）外，各加50µL鏈酶親(qin)和素(su)酶聯物至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復步(bu)驟4
• 加(jia)100 µL TMB底(di)物(wu)液(ye)至各孔中(zhong)
• 黑暗處，精(jing)確溫育(yu)15分(fen)鐘
• 按(an)加TMB底(di)物液的順序和速度，加100 µL終(zhong)止液至各孔中(zhong)。

藍色溶液在孵育過程中(zhong)變為黃色。

注(zhu)意：強陽性(xing)樣(yang)(yang)品會導(dao)致(zhi)色(se)原產(chan)生沉淀(dian)，沉淀(dian)的產(chan)生會對讀數產(chan)生影響。所以先用陰(yin)性(xing)基質進行(xing)預稀(xi)(xi)(xi)釋，建議1：1的比例稀(xi)(xi)(xi)釋，然后，再1個單位的預稀(xi)(xi)(xi)釋樣(yang)(yang)品+100個單位的樣(yang)(yang)品稀(xi)(xi)(xi)釋液。終結果（以U計(ji)算）乘以預稀(xi)(xi)(xi)釋因(yin)子2即可

• 加入(ru)終止液(ye)后，30分鐘(zhong)內，在(zai)酶標儀(yi)450/620 nm處(chu)讀(du)數

【結果計(ji)算】

用A1空白對照孔對酶標(biao)儀(yi)進行(xing)調(diao)零

如遇技術問題，酶標儀(yi)不能調零。 所測樣品的吸光度值減去空白對(dui)照的讀數值，

即可得(de)到可靠的(de)讀數。

在酶(mei)標儀處450 nm處測讀所有質控品和樣品的(de)吸光度值。620 nm作為參(can)考波長。

如進行(xing)雙(shuang)孔檢(jian)測，計算吸光度(du)均值。

實(shi)驗有效(xiao)性(xing)標準(zhun)

如試驗有效，必須滿足以下要求(qiu)

·空白對照（A1）：       吸光度值(zhi)<  0.100

&middot;陰性(xing)質控（B1）：       吸光度(du)值(zhi)<  臨界讀數(shu)

·臨界質(zhi)控（C1+D1）    ; 吸光度值   0.150~1.300

·陽性質控(kong)（E1）     &nbsp;  吸光(guang)度值>  臨界讀數

如上述標準沒滿足，試(shi)驗視為無(wu)效(xiao)，試(shi)驗應重測。

結果計算

臨界讀數是雙(shuang)孔(kong)臨界質控的吸光(guang)度均值

示(shi)范： 臨界(jie)吸光(guang)度值0.39 +臨界(jie)吸光(guang)度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即(ji)吸光度值＝0.38

進口寨卡病毒IgM抗(kang)體檢測(ce)試劑（德國IBL)