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基孔肯雅熱(re)IgG檢測試(shi)劑盒（酶聯免疫法(fa)）

【產品名(ming)稱】

通用名(ming)稱：基(ji)孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（酶聯(lian)免疫法）

英文名稱(cheng)：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【產(chan)品規(gui)格】

96T

【預期用途(tu)】

試(shi)劑盒可用于人血(xue)清和(he)血(xue)漿(jiang)（檸檬(meng)酸鹽）中基(ji)孔肯(ken)雅熱IgG抗體的定(ding)性(xing)檢測。

【檢(jian)測原理(li)】

試劑盒采用酶聯免疫(yi)法。微孔中預(yu)包被有抗人IgG，用于結(jie)合(he)樣(yang)品中(zhong)相應的(de)(de)抗(kang)體(ti)(ti)。洗板后，去除非(fei)結(jie)合(he)的(de)(de)樣(yang)品。再(zai)加(jia)入基(ji)孔(kong)(kong)肯(ken)雅熱(re)抗(kang)原液，再(zai)次(ci)洗板后，再(zai)加(jia)入生物(wu)素化的(de)(de)基(ji)孔(kong)(kong)肯(ken)雅熱(re)抗(kang)體(ti)(ti)。加(jia)入鏈霉(mei)親(qin)和(he)素標記結(jie)合(he)物(wu)（酶聯(lian)物(wu)），與固相的(de)(de)特異性的(de)(de)基(ji)孔(kong)(kong)肯(ken)雅熱(re)復合(he)物(wu)結(jie)合(he)。加(jia)入TMB底(di)物(wu)液后，微孔(kong)(kong)中(zhong)顯(xian)藍色。顯(xian)色的(de)(de)強度與病(bing)人樣(yang)品中(zhong)基(ji)孔(kong)(kong)肯(ken)雅熱(re)IgG抗體的量成(cheng)正比。加入終止液終止酶(mei)反應，形成(cheng)黃(huang)色終點產(chan)物。后在酶(mei)標儀處450 nm讀數(shu)。

【檢測方法】

試劑準備

試驗(yan)前，將(jiang)所有試劑，樣品，質控品平衡至室(shi)溫(20~25℃)

基孔肯雅熱(re)抗原：

每瓶加入1mL稀釋洗滌液(ye)溶解，緩(huan)慢(man)加入，室溫(wen)下靜置溫(wen)育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩(wen)定保存1天。

洗(xi)滌液：

1個單(dan)位(wei)的濃(nong)縮洗滌液+19個單(dan)位(wei)的雙(shuang)蒸(zheng)水。

如：10mL濃縮洗滌液(ye)+190 mL雙蒸水(shui)。稀釋洗(xi)(xi)滌液在室溫下能穩定保存5天。開瓶后，濃縮的洗(xi)(xi)滌液在2~8℃可(ke)穩定保存至有(you)效期.

檢(jian)測(ce)步驟

試驗前，仔細閱(yue)讀說明書(shu)。嚴格執行說明書(shu)要求才能得(de)到(dao)優質(zhi)結果(guo)。如(ru)試驗使(shi)用自動(dong)洗板機，建議每孔(kong)350µL，洗板(ban)5次(ci)（如手工(gong)洗，則每孔300µL，洗(xi)板(ban)3次）。試(shi)驗前，確定好樣品，質控品的加樣布局方(fang)案。取所(suo)需(xu)板(ban)條置于板(ban)架上。

至少設

1孔(kong)（如A1）         空白對照(zhao)

1孔 (如B1)  ;        陰性質控(kong)

2孔(kong) (如C1+D1）      臨界(jie)質控

1孔(kong)（如E1）    ;     陽(yang)性質控

如覺(jue)得有(you)必(bi)要，建議樣品和(he)質控品都(dou)作雙份檢測。

試(shi)驗(yan)應按(an)同樣的加(jia)樣順(shun)序加(jia)取試(shi)劑，避(bi)免不同的時(shi)間間隔造成誤差。

使用(yong)新的一次性加(jia)(jia)樣槍頭，加(jia)(jia)各質控品(pin)(pin)，樣品(pin)(pin)

調節(jie)恒(heng)溫箱為37±1℃

• 加(jia)50µL質控品(pin)(pin)和稀(xi)釋樣品(pin)(pin)至相應各孔中，設A1作為(wei)空(kong)白對照
• 封板(ban)紙蓋板(ban)
• 37 ± 1 ℃溫育1小時(shi)±5分鐘(zhong)
• 溫育后，移除封板紙，倒出微孔內液體(ti)，每(mei)孔用300µL稀釋洗滌液，洗板3次，避免洗滌液相互溢濺至其(qi)它微孔。每(mei)次洗板時(shi)，浸(jin)泡(pao)時(shi)間應大于5秒。后，在吸水紙(zhi)上拍干(gan)，去除殘留液滴。

注意：洗滌步驟很關鍵(jian)。不充分(fen)的(de)洗板，會導致不精確或錯誤上升的(de)吸(xi)光度值。

• 除空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)（A1）外(wai)，加50µL基孔(kong)(kong)肯雅熱液(ye)抗原液(ye)至各孔(kong)(kong)，蓋(gai)板
• 室溫下(xia)溫育30分(fen)鐘
• 重復步驟4
• 除空(kong)白(bai)對照孔（A1）外，加50µL 基孔肯(ken)雅熱(re)液(ye)抗體液(ye)至各孔，蓋板(ban)
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復步驟4
• 除空(kong)白(bai)對照孔(kong)（A1）外，各加(jia)50µL鏈酶親和素酶聯物至各孔，蓋板
• 室溫下溫(wen)育30分鐘(zhong)
• 重復步驟(zou)4
• 加(jia)100 µL TMB底物液至各孔(kong)中
• 黑暗(an)處，精確(que)溫育15分鐘
• 按(an)加TMB底物(wu)液(ye)的順序和速度，加100 µL終止(zhi)液至各孔(kong)中。

藍色溶液在孵(fu)育過(guo)程中變為黃色。

注意：強陽性樣品(pin)(pin)會導致色原產生(sheng)沉淀，沉淀的(de)產生(sheng)會對讀數(shu)產生(sheng)影響(xiang)。所以(yi)先用陰(yin)性基質進行預(yu)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)，建議(yi)1：1的(de)比例稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)，然(ran)后，再1個單位的(de)預(yu)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)樣品(pin)(pin)+100個單位的(de)樣品(pin)(pin)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)液(ye)。終(zhong)結(jie)果（以(yi)U計算）乘(cheng)以(yi)預(yu)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)因子(zi)2即可

• 加入終止液后，30分鐘內，在酶(mei)標儀450/620 nm處讀數

【結果(guo)計算(suan)】

用A1空白對照孔對酶(mei)標儀進行調零

如遇技術(shu)問題，酶標儀不能調零。 所測樣品(pin)的吸光度值(zhi)減去空(kong)白對照的讀數值(zhi)，

即可(ke)得到可(ke)靠(kao)的(de)讀數。

在酶標儀處450 nm處測讀(du)所(suo)有(you)質控(kong)品和樣品的吸光(guang)度(du)值。620 nm作為參考(kao)波(bo)長。

如進行雙孔檢測，計算吸光度均值。

實(shi)驗有效性標準(zhun)

如(ru)試(shi)驗有效，必(bi)須滿足以(yi)下要求

&middot;空白對照（A1）：      &nbsp;吸光(guang)度值<  0.100

·陰性質控（B1）：       吸光度值(zhi)<  臨(lin)界讀(du)數

·臨界(jie)質控(kong)（C1+D1）     吸光(guang)度值   0.150~1.300

·陽性(xing)質控（E1）   &nbsp;  &nbsp; 吸(xi)光度(du)值>  臨界讀數

如(ru)上述標準沒滿足，試驗視為無效，試驗應(ying)重測。

結果計算

臨界(jie)讀數是(shi)雙孔臨界(jie)質控(kong)的吸光度均值

示范(fan)： 臨界吸(xi)光度值0.39 +臨界吸(xi)光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即(ji)吸光(guang)度值(zhi)＝0.38

德(de)國IBL基(ji)孔肯雅熱IgG檢(jian)測試劑（酶聯法)