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基孔(kong)肯(ken)雅熱(re)IgG檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【產品(pin)名稱】

通用名稱：基孔肯雅熱(re)IgG檢(jian)測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【產品(pin)規格】

96T

【預期(qi)用途】

試劑盒可用(yong)于(yu)人(ren)血清和血漿(jiang)（檸檬酸鹽(yan)）中基孔肯雅熱IgG抗體(ti)的定性(xing)檢測。

【檢測原理】

試劑盒采用酶(mei)聯(lian)免疫法(fa)。微孔(kong)中(zhong)預包(bao)被(bei)有抗人(ren)IgG，用于結(jie)合樣(yang)品中(zhong)相應(ying)的(de)(de)抗(kang)體。洗板后(hou)，去除非(fei)結(jie)合的(de)(de)樣(yang)品。再(zai)加(jia)入(ru)基(ji)孔肯(ken)雅熱(re)(re)抗(kang)原液，再(zai)次洗板后(hou)，再(zai)加(jia)入(ru)生物(wu)素化的(de)(de)基(ji)孔肯(ken)雅熱(re)(re)抗(kang)體。加(jia)入(ru)鏈霉親和素標記結(jie)合物(wu)（酶聯物(wu)），與(yu)固相的(de)(de)特異性的(de)(de)基(ji)孔肯(ken)雅熱(re)(re)復合物(wu)結(jie)合。加(jia)入(ru)TMB底物(wu)液后(hou)，微孔中(zhong)顯(xian)藍色(se)(se)。顯(xian)色(se)(se)的(de)(de)強(qiang)度與(yu)病人樣(yang)品中(zhong)基(ji)孔肯(ken)雅熱(re)(re)IgG抗體的量(liang)成(cheng)正比。加(jia)入終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)酶反應，形成(cheng)黃色終(zhong)點產物。后在酶標(biao)儀處450 nm讀數。

【檢測(ce)方法】

試劑準備

試驗前，將所有試劑，樣(yang)品(pin)，質控品(pin)平(ping)衡至室溫(20~25℃)

基孔肯雅熱(re)抗原：

每瓶加入1mL稀釋洗(xi)滌液溶解，緩(huan)慢(man)加入，室(shi)溫下靜置溫育15min，制成即用型抗原(yuan)液。此抗原(yuan)液在2~8 ℃可(ke)穩定保存1天。

洗滌液(ye)：

1個(ge)單位的(de)濃縮洗滌液+19個(ge)單位的(de)雙(shuang)蒸水。

如：10mL濃縮(suo)洗滌液+190 mL雙蒸水(shui)。稀釋洗滌(di)(di)液(ye)在(zai)(zai)室溫下能(neng)穩定保存5天。開瓶后，濃縮的洗滌(di)(di)液(ye)在(zai)(zai)2~8℃可穩(wen)定保存至(zhi)有效期.

檢(jian)測步驟(zou)

試驗前(qian)，仔細(xi)閱讀說(shuo)(shuo)明書。嚴格(ge)執行說(shuo)(shuo)明書要求才能(neng)得到優質結果。如(ru)試驗使用自動(dong)洗板機，建議每(mei)孔(kong)350µL，洗板5次(ci)（如手工洗，則每孔(kong)300µL，洗板3次）。試驗前，確定好樣(yang)品，質控品的加樣(yang)布局(ju)方案。取(qu)所需板條置于板架上(shang)。

至少(shao)設

1孔（如(ru)A1）         空白(bai)對照

1孔 (如B1)          陰性質控(kong)

2孔 (如(ru)C1+D1）      臨界質控(kong)

1孔(kong)（如E1）         陽性質控

如覺得有必要，建議樣品和質(zhi)控品都作雙份檢測。

試驗(yan)應(ying)按同樣(yang)的加樣(yang)順(shun)序(xu)加取試劑，避免不同的時間間隔造成誤差。

使(shi)用(yong)新(xin)的一次(ci)性加樣(yang)(yang)槍頭，加各質控品(pin)，樣(yang)(yang)品(pin)

調節(jie)恒溫箱為37±1℃

• 加50µL質(zhi)控品和稀釋樣(yang)品至相應各(ge)孔中(zhong)，設A1作為空(kong)白(bai)對(dui)照
• 封(feng)板紙蓋板
• 37 ± 1 ℃溫(wen)育1小時±5分鐘
• 溫育后，移除封(feng)板紙，倒出微孔內(nei)液體，每(mei)孔用300µL稀(xi)釋(shi)洗(xi)滌液，洗(xi)板3次(ci)，避免(mian)洗(xi)滌液相互溢濺至其它(ta)微孔。每(mei)次(ci)洗(xi)板時(shi)，浸(jin)泡時(shi)間應大于5秒。后(hou)，在吸水紙上拍干，去除殘(can)留(liu)液滴。

注(zhu)意：洗滌步驟很關鍵(jian)。不(bu)充分的(de)洗板，會導致不(bu)精確或錯(cuo)誤上升(sheng)的(de)吸光度值(zhi)。

• 除(chu)空白對照孔（A1）外，加50µL基(ji)孔肯雅熱液抗原液至(zhi)各(ge)孔，蓋板(ban)
• 室溫(wen)下溫育30分(fen)鐘
• 重(zhong)復(fu)步(bu)驟(zou)4
• 除空白(bai)對照孔（A1）外，加(jia)50µL 基孔(kong)肯雅熱液抗(kang)體液至各孔(kong)，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復(fu)步驟4
• 除空白對照孔（A1）外，各加50µL鏈酶(mei)親(qin)和素酶(mei)聯物至各孔，蓋板
• 室溫(wen)下溫育30分鐘
• 重(zhong)復(fu)步驟(zou)4
• 加(jia)100 µL TMB底物液至各孔中
• 黑暗處，精確溫育15分鐘
• 按(an)加TMB底物液的(de)順序和速度，加100 µL終止液(ye)至(zhi)各孔中。

藍色(se)溶液(ye)在(zai)孵育過程中(zhong)變為黃色(se)。

注意：強陽性樣(yang)品(pin)會(hui)導致色(se)原產(chan)(chan)生沉(chen)淀，沉(chen)淀的(de)(de)產(chan)(chan)生會(hui)對(dui)讀數(shu)產(chan)(chan)生影(ying)響。所以(yi)先用陰性基質進行(xing)預稀(xi)(xi)(xi)釋，建議1：1的(de)(de)比例(li)稀(xi)(xi)(xi)釋，然后，再1個單位(wei)的(de)(de)預稀(xi)(xi)(xi)釋樣(yang)品(pin)+100個單位(wei)的(de)(de)樣(yang)品(pin)稀(xi)(xi)(xi)釋液。終結果(guo)（以(yi)U計算）乘(cheng)以(yi)預稀(xi)(xi)(xi)釋因子2即可(ke)

• 加入終止液(ye)后，30分鐘內，在酶標儀450/620 nm處讀數

【結果計算】

用A1空白(bai)對照孔(kong)對酶標儀進行調零

如遇技(ji)術(shu)問題(ti)，酶標儀不能調零。 所(suo)測樣品(pin)的(de)吸光度值減去(qu)空白(bai)對照(zhao)的(de)讀(du)數值，

即可得到(dao)可靠的讀數。

在酶標(biao)儀處(chu)450 nm處測讀所有質控(kong)品(pin)和樣品(pin)的吸(xi)光(guang)度(du)值。620 nm作為參考波長。

如進(jin)行(xing)雙孔檢測(ce)，計算吸(xi)光(guang)度均值。

實驗有效性標準(zhun)

如試驗(yan)有效，必須(xu)滿足(zu)以下要求

·空白對照(zhao)（A1）：   &nbsp;   吸(xi)光度值<  0.100

·陰性質控（B1）：      &nbsp;吸光度值(zhi)<  臨界讀數

·臨界質控(kong)（C1+D1）     吸光度值   0.150~1.300

·陽性質(zhi)控(kong)（E1）        吸光度值>  臨界讀數

如上述標準沒滿足(zu)，試驗視(shi)為無(wu)效，試驗應重測。

結果計算

臨(lin)界(jie)讀數是(shi)雙孔臨(lin)界(jie)質控的吸光度均值

示(shi)范(fan)： 臨界(jie)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)0.39 +臨界(jie)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值＝0.38

進口基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（德國IBL)