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登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒

澳洲(zhou)PANBIO登革(ge)熱(re)抗原NS1快速檢測(ce)用于定性的快速檢測(ce)人群血(xue)(xue)清、血(xue)(xue)漿或全血(xue)(xue)中登革病毒的IgM及IgG抗體(ti)。可在15分鐘內檢測(ce)結果。

· 結(jie)果(guo)快速，15分鐘出結(jie)果(guo)。
· 結果(guo)值得信賴，敏感性和特異性均> 90%
· 方式靈(ling)活，樣本(ben)可(ke)為全血(xue)、血(xue)清(qing)或血(xue)漿
· 能區分(fen)出登革的原發感染(ran)和繼(ji)發感染(ran)
· 可進行完整的測(ce)試(shi)，保(bao)存(cun)(cun)方便(bian)，常溫(wen)2-30℃保(bao)存(cun)(cun)

標(biao)本采集和制備

靜脈(mo)穿(chuan)刺獲取的血液應該置于(yu)室溫(wen)（20-25℃）下(xia)直到凝塊形成，再按照臨床實驗室標準化研究院（CLSI）的《認可標準——診(zhen)斷用(yong)血(xue)液標本(ben)的靜脈穿刺采集程序，H3》離心。應該(gai)盡快分離血(xue)清。如果在2天內不進(jin)行檢測，血(xue)清應該(gai)2-8℃冷藏或者低于或等(deng)于- 20℃冷凍(dong)儲(chu)存。不*使(shi)用自(zi)解凍(dong)冷凍(dong)機儲(chu)存血清。不*使(shi)用黃疸血清，以及出(chu)現溶血、脂血或(huo)微生(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)長(chang)的血清。CLSI提供(gong)了儲(chu)存血液(ye)標本(ben)的建議(yi)，《認可標準——血液(ye)標本(ben)的處理加工程(cheng)序(xu)，H18》。

檢測(ce)程序

注： 確(que)保所有試劑(ji)在開始(shi)測定前平(ping)衡至室溫(wen)（20-25℃）。在(zai)所給(gei)時間(jian)和溫度范圍(wei)以(yi)外(wai)進行(xing)測(ce)試(shi)可能產(chan)生無效的結果。不在(zai)預定時間(jian)和溫度范圍(wei)內(nei)的測(ce)試(shi)必須進行(xing)重復。

ELISA程序

• 從鋁(lv)箔(bo)袋(dai)中取出(chu)所需數量的(de)微孔板(ban)并(bing)插(cha)入測試(shi)條(tiao)槽。陰性質(zhi)控品(pin)、陽(yang)性質(zhi)控品(pin)和校準品(pin)各需5個微孔，一式(shi)三(san)份。確保剩下未使用的(de)微孔密封于(yu)鋁(lv)箔(bo)袋(dai)內。
• 使用適(shi)當的(de)試管或微滴定板稀(xi)釋陽性(xing)質控品（P）、陰性(xing)質控品（N）、校準品（CAL）和患(huan)者樣本。
  • 混(hun)合10μL血清(qing)與1000μL樣(yang)本(ben)稀釋劑。混(hun)合均(jun)勻。 

或者，

• 混合(he)10μL血清(qing)與90μL樣本稀(xi)釋(shi)(shi)劑。取出(chu)20μL稀(xi)釋(shi)(shi)血清(qing)，加入(ru)180μL樣本稀(xi)釋(shi)(shi)劑。混合(he)均勻(yun)。

• 吸取(qu)100 µL樣本(ben)稀(xi)釋劑、質(zhi)控品和(he)校(xiao)準品添加(jia)至對應(ying)的微孔中。
• 蓋住測定板(ban)并在37°C ± 1°C孵育30分鐘(zhong)。
• 用稀(xi)釋后的(de)清(qing)洗緩沖液洗6次（參(can)考清(qing)洗程序）。
• 吸取100 µL HRP標記抗人IgG添加(jia)到每個微孔(kong)中。
• 蓋住測定板(ban)并在37°C ± 1°C孵育30分鐘。
• 用稀(xi)釋后(hou)的清洗(xi)緩沖(chong)液洗(xi)6次（參考(kao)清洗(xi)程(cheng)序）。
• 吸(xi)取100 µL TMB添(tian)加(jia)到每個孔中(zhong)。
• 在室溫（20-25℃）下(xia)孵(fu)育10分鐘，從(cong)第①次添加開始計時。藍色將會顯現。
• 按照相同(tong)(tong)順序吸取100μL終止液添(tian)加到(dao)每(mei)個(ge)孔中，計時同(tong)(tong)TMB添(tian)加步驟(zou)。混合均勻。藍色將變成黃色。
• 在30分鐘內讀取(qu)每(mei)個(ge)孔在450nm波長(chang)的吸光度，參考(kao)濾波器為600-650nm。

注： 如果使(shi)用雙波長分光光度計，將參(can)考(kao)濾波器(qi)設定在(zai)600-650nm之(zhi)間(jian)。在(zai)沒有參(can)考(kao)濾波器(qi)的(de)情況下(xia)讀取450nm的(de)微孔(kong)結果可能(neng)由于(yu)背景(jing)原因導致(zhi)吸光度偏高(gao)。

清洗程(cheng)序

為了清(qing)除未(wei)復合的(de)樣本或成分，有效(xiao)清(qing)洗(xi)是ELISA程序的(de)關(guan)鍵步驟。

A.自動洗板機(ji)

• *抽(chou)凈所有(you)微(wei)孔。
• 在清(qing)洗循環期間(jian)將(jiang)每個孔裝滿至邊緣（350μL）。
• 完成(cheng)6次清(qing)洗(xi)后，將測(ce)定板倒(dao)立于吸水紙巾上用力(li)敲(qiao)打，確(que)保(bao)清(qing)除(chu)所有清(qing)洗(xi)緩沖液(ye)。
• 為了確保有效清洗(xi)，必須維持自動洗(xi)板機良好的保養。必須始終遵(zun)守廠商的清潔說明(ming)。

B.手動清洗

• 將(jiang)測定板的(de)內含物丟棄到適當的(de)廢物容器。
• 用適(shi)當的擠壓(ya)瓶將微孔填滿(man)清(qing)洗緩(huan)沖液。避免清(qing)洗緩(huan)沖液起(qi)泡(pao)，否則會(hui)降(jiang)低清(qing)洗效(xiao)率(lv)。立(li)即丟棄微孔里的清(qing)洗緩(huan)沖液。
• 再將微孔填(tian)滿清洗緩沖液(ye)，并立(li)即(ji)丟棄。
• 重復步驟(zou)（3）4次(ci)，共(gong)用清(qing)洗緩(huan)沖液清(qing)洗六（6）次(ci)。
• 后一次清(qing)(qing)洗完成后，丟(diu)棄(qi)微孔的(de)內(nei)含物并將測定板(ban)置于吸水紙(zhi)巾(jin)上敲打，以確保(bao)清(qing)(qing)除所有清(qing)(qing)洗緩沖液(ye)。

質量控制

每個試劑(ji)(ji)盒包含校(xiao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)，陽(yang)性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)和(he)陰性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)。這些組成(cheng)的(de)可接(jie)受值參見附帶的(de)規(gui)(gui)格(ge)表。陰性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)和(he)陽(yang)性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)用于監測重大(da)的(de)試劑(ji)(ji)失(shi)敗。陽(yang)性(xing)(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)不能確保測定臨界(jie)值的(de)精密(mi)度。如(ru)果(guo)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)或校(xiao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)任一吸光度讀數不符合規(gui)(gui)定，則測試無(wu)效且應重新測試。如(ru)果(guo)測試無(wu)效，則不能報告患者結果(guo)。必須按照地方、州(zhou)和(he)/或聯邦(bang)法規(gui)(gui)或認證要(yao)求以及實驗室標準(zhun)QC程序執行(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)控(kong)(kong)(kong)（QC）要(yao)求。有(you)關適當的(de)QC操作(zuo)規(gui)(gui)程指南(nan)，建議用戶參考CLSI C24-A和(he)42 CFR 493.1256。

預期值和測試局限(xian)性

• 必須(xu)結(jie)合患者(zhe)的(de)臨床(chuang)體征和(he)癥狀來做臨床(chuang)診斷(duan)。該試劑(ji)盒的(de)結(jie)果(guo)本身并(bing)沒有診斷(duan)作用(yong)，應該與其他臨床(chuang)數(shu)據和(he)患者(zhe)癥狀聯用(yong)。
• 陽性(xing)預測值(zhi)取決于病毒(du)存在的可能(neng)性(xing)。只(zhi)能(neng)檢測有臨床(chuang)癥(zheng)狀或疑(yi)似接觸過相(xiang)關(guan)病毒(du)的患者。
• 黃(huang)病(bing)毒屬(shu)內的(de)血清型交叉反(fan)應（登革熱1、2、3、4，日本(ben)腦炎，西尼羅河(he)病毒，墨累山谷腦炎等）在IgG， 水平上十分常見^3,4,5。在東(dong)南亞進行(xing)的試驗表明90%的日(ri)本腦炎患者（n=20）的IgG間接(jie)結果大于10 Panbio單位。
• 利用(yong)地方人群測(ce)定了臨(lin)界值。 人(ren)群血(xue)清流行(xing)病(bing)學在不同地理區(qu)域應(ying)該隨時間而變化(hua)。終(zhong)，臨界值需要(yao)根(gen)據(ju)對當地的(de)研究進(jin)行(xing)調整。
• 尚未確定目測結果判定的性能特征。
• ELISA篩選試驗結果表明登革熱感染(ran)的所有(you)血清必(bi)須送到參考實驗室進行陽性確認和流行病學記錄。

性(xing)能(neng)特征

用Panbio Dengue IgG Indirect ELISA對386份(fen)經過血凝抑(yi)制試驗（HAI）和ELISA方(fang)法的回(hui)顧性(xing)血清進行(xing)檢測。這些(xie)血清包(bao)括來(lai)自(zi)以下組別(bie)的樣(yang)本(ben)(ben)：108份血清陰性(xing)樣(yang)本(ben)(ben)、84份原發(fa)性(xing)樣(yang)本(ben)(ben)、94份繼發(fa)性(xing)樣(yang)本(ben)(ben)和100份地方(fang)性(xing)樣(yang)本(ben)(ben)。 通過(guo)Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 對這(zhe)些血清樣本進行檢測并將其結果與血清的(de)登革熱感染狀態(tai)進行對比，從而確定檢測的靈(ling)敏度、特(te)異性(xing)(xing)和一致性(xing)(xing)。  

馬來西(xi)亞(ya)的一所大學(xue)通過基于(yu)世界衛生組(zu)織（WHO）標準的HAI試驗將(jiang)115份血清樣(yang)本確定為原發性(xing)或(huo)繼發性(xing)登革(ge)熱(re)感染。 該(gai)試驗組由23份(fen)(fen)原發性(xing)和92份(fen)(fen)繼發性(xing)登革熱樣本構(gou)成(cheng)。

登革熱IgM/IgG抗體檢測試劑盒