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蜱傳(chuan)腦(nao)炎病毒lgG抗體檢測試(shi)劑(ji)盒

【產品(pin)名稱】

通用名稱：蜱傳腦炎(yan)病毒lgG檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【產品規格】

96T

【預(yu)期用途(tu)】

試劑盒可用于(yu)人血(xue)清和血(xue)漿（檸檬酸鹽）中蜱傳腦炎病(bing)毒lgG抗體的定性檢測。

【前(qian)言簡介】

蜱傳腦炎病(bing)(bing)毒(du)是一種屬(shu)(shu)(shu)于(yu)披(pi)膜病(bing)(bing)毒(du)科甲(jia)病(bing)(bing)毒(du)屬(shu)(shu)(shu)的(de)節(jie)肢動物(wu)媒介病(bing)(bing)毒(du)。披(pi)膜病(bing)(bing)毒(du)科甲(jia)病(bing)(bing)毒(du)屬(shu)(shu)(shu)（α-病(bing)(bing)毒(du)屬(shu)(shu)(shu)）至少有24種不同的(de)種屬(shu)(shu)(shu)。它們是一類脂(zhi)質圍繞的(de)病(bing)(bing)毒(du)體，直徑約(yue)為(wei)50-60nm。

α-病毒感染初是由感染的蚊(wen)子叮(ding)咬(yao)引起的，感染后，病毒借機進入皮下和皮膚(fu)組織(zhi)。1至12天，演變為(wei)蜱傳腦炎。

蜱傳腦炎是一種急性病(bing)(bing)毒感染，以快速病(bing)(bing)變為特征，感染后健康狀(zhuang)態(tai)迅(xun)速惡(e)化產生(sheng)疾病(bing)(bing)，包括嚴重的(de)關節(jie)痛和發燒。

體溫會(hui)突然上升(sheng)，可高(gao)達40℃，并伴(ban)有(you)寒戰。幾天后，發(fa)燒癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)減(jian)弱，繼而復(fu)發(fa)，這樣周(zhou)而復(fu)始的類(lei)似鞍狀(zhuang)(zhuang)峰(feng)狀(zhuang)(zhuang)曲線 體溫。關(guan)(guan)(guan)節(jie)痛(tong)主要表現(xian)(xian)(xian)在(zai)多關(guan)(guan)(guan)節(jie)，主要累及小關(guan)(guan)(guan)節(jie)區域的嚴重受損(sun)(sun)，隨(sui)運動增(zeng)加(jia)，疼(teng)痛(tong)加(jia)劇(ju)。患(huan)者(zhe)通常(chang)(chang)應避免移動。關(guan)(guan)(guan)節(jie)會(hui)腫脹(zhang)，但無明顯關(guan)(guan)(guan)節(jie)液體積聚。這類(lei)癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)持續(xu)1周(zhou)至數(shu)月并伴(ban)隨(sui)有(you)肌痛(tong)。病發(fa)一(yi)天會(hui)出(chu)現(xian)(xian)(xian)皮(pi)(pi)疹(zhen)(zhen)，但也(ye)有(you)延(yan)遲出(chu)現(xian)(xian)(xian)的，然后皮(pi)(pi)疹(zhen)(zhen)漫延(yan)至臉部，頸部，演變(bian)為(wei)斑疹(zhen)(zhen)、丘疹(zhen)(zhen)或紫(zi)癜 ,疹(zhen)(zhen)間皮(pi)(pi)膚(fu)多為(wei)正常(chang)(chang) ,伴(ban)有(you)瘙癢感，繼而軀(qu)干(gan)、四肢的伸展側(ce)、手掌(zhang)和(he)足底出(chu)現(xian)(xian)(xian)皮(pi)(pi)疹(zhen)(zhen)。也(ye)能觀察到瘀斑皮(pi)(pi)膚(fu)受損(sun)(sun)。頭痛(tong)，畏光(guang)，有(you)明顯咽(yan)炎，惡(e)心，嘔吐(tu)的咽(yan)喉痛(tong)也(ye)是病發(fa)可能出(chu)現(xian)(xian)(xian)的癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)。很(hen)多情況(kuang)下，關(guan)(guan)(guan)節(jie)痛(tong)和(he)多發(fa)性(xing)(xing)關(guan)(guan)(guan)節(jie)炎會(hui)持續(xu)數(shu)月仍至數(shu)年(nian)，常(chang)(chang)伴(ban)有(you)關(guan)(guan)(guan)節(jie)受損(sun)(sun)，更(geng)有(you)罕見者(zhe)，出(chu)現(xian)(xian)(xian)包括腦炎，高(gao)致命(ming)性(xing)(xing)腦膜腦炎的后遺癥(zheng)。

這類病毒(du)在(zai)非洲和(he)亞(ya)洲為高發(fa)區(qu)。20%至(zhi)90%熱(re)帶(dai)和(he)亞(ya)熱(re)區(qu)人(ren)(ren)群發(fa)現有(you)感染(ran)的(de)血(xue)清學(xue)證(zheng)據(ju)。由于伊蚊在(zai)北非和(he)南美急(ji)劇橫行(xing)，這些地帶(dai)的(de)人(ren)(ren)群對病毒(du)都(dou)有(you)易感性，因(yin)此造成(cheng)爆發(fa)疫(yi)情的(de)可能性。中歐人(ren)(ren)群的(de)感染(ran)主要是(shi)因(yin)為一些曾到過熱(re)帶(dai)和(he)亞(ya)熱(re)帶(dai)的(de)旅行(xing)者攜帶(dai)蜱傳腦炎病(bing)毒而(er)傳染(ran)的。

病(bing)毒感染可由以下方法鑒別

• 血清學： 免疫熒光(guang)、酶(mei)免法(fa)檢測(ce)相應(ying)的抗體

【檢(jian)測原理】

試劑盒采用酶(mei)聯免疫法。微(wei)孔(kong)中預包被有抗(kang)(kang)人IgG，用于結(jie)合(he)樣品中相應的抗(kang)(kang)體。洗(xi)板后，去除非結(jie)合(he)的樣品。再加(jia)入蜱傳腦(nao)炎抗原液，再次(ci)洗板后，再加(jia)入生(sheng)物素化的蜱(pi)傳腦炎抗(kang)體(ti)。加入鏈霉親和(he)素標記(ji)結合物(wu)（酶聯物(wu)），與固相的(de)特異性的(de)蜱傳腦炎復合物(wu)結合。加入TMB底物(wu)液后，微孔中顯(xian)藍色(se)(se)。顯(xian)色(se)(se)的強度與(yu)病人樣品(pin)中蜱傳腦(nao)炎病毒(du)lgG抗體的量成(cheng)正比。加入終(zhong)止液終(zhong)止酶反應，形成(cheng)黃色終(zhong)點產物。后在(zai)酶標(biao)儀(yi)處450 nm讀數。

【試(shi)劑盒組成(cheng)成(cheng)分】

微孔板            12×8

包(bao)被有抗人IgG

樣品稀釋液        1×100 mL

即用型、pH7.2±0.2、黃色、白蓋

洗滌液            1×50ml

20倍濃縮(suo)、pH7.2±0.2、白蓋

蜱(pi)傳腦炎抗原液  6瓶

凍干品、紅蓋

蜱(pi)傳腦炎抗體液  1×6ml

含生物(wu)素(su)化(hua)蜱傳(chuan)腦炎抗(kang)體、即用(yong)型、藍(lan)色、白蓋

鏈霉親和素酶聯物(wu)  1×6ml

含鏈霉親和素標記的HRP、即(ji)用型、紅色、黑蓋

終止液(ye)            1×15ml

即用型、含硫酸、濃度0.2mol/L、紅蓋

底物液            1×15ml

即用型、黃蓋

陽性質控          1×1.5ml

即用(yong)型、黃色(se)、紅(hong)蓋(gai)

臨界質(zhi)控          1×2ml

即用型、黃色、綠蓋

陰性質(zhi)控          1×1.5ml

即(ji)用型、黃色、藍蓋

封板紙(zhi)

支架(jia)

所需材料（未提供）

·酶標儀(yi)（450/620 nm）

·恒溫箱（37 ℃）

·洗(xi)瓶或自動(dong)洗(xi)板機

·移液管（規格10和1000 µL）

·震蕩(dang)器

·去(qu)離(li)子(zi)水或(huo)蒸餾(liu)水

·一次性(xing)試管

·計時器

【儲存條件】

試劑盒存(cun)于2~8℃，能穩定保存(cun)至有效期，有效期見標簽 。

【樣品(pin)要求】

試(shi)(shi)驗(yan)采(cai)用人血(xue)清或血(xue)漿（檸檬酸鹽）。收集的樣(yang)品在2~8℃可(ke)保(bao)存5天。更(geng)長時間，分成小(xiao)份，凍(dong)存于（-20~-70℃）。 凍(dong)存樣(yang)品，試(shi)(shi)驗(yan)前應*解凍(dong)。避免反(fan)復凍(dong)融。

不建(jian)議(yi)使用熱滅活樣品

樣品稀釋

試(shi)驗(yan)前樣品(pin)應稀(xi)釋(shi)：1個單位(wei)(wei)的(de)樣品(pin)+100個單位(wei)(wei)的(de)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液，如10µL樣品(pin)+1mL樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液，在試(shi)管(guan)中旋渦搖勻。

【檢測方法】

試劑準備

試驗前(qian)，將(jiang)所(suo)有試劑，樣品，質控品平衡至室溫(20~25℃)

蜱(pi)傳腦炎抗(kang)原(yuan)：

每(mei)瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解，緩慢(man)加入，室溫下(xia)靜置溫育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩定(ding)保存1天。

洗滌液：

1個單位的濃縮洗(xi)滌液+19個單位的雙蒸(zheng)水(shui)。

如：10mL濃縮洗(xi)滌液+190 mL雙蒸(zheng)水。稀釋洗(xi)滌液在(zai)室(shi)溫下能(neng)穩定(ding)保存(cun)5天(tian)。開瓶后，濃縮的洗(xi)滌液在(zai)2~8℃可穩定(ding)保存(cun)至有效期(qi).

檢測(ce)步(bu)驟

試驗前，仔(zi)細閱讀說明(ming)書。嚴格(ge)執行說明(ming)書要求才能得到(dao)優良結果。如試驗使(shi)用自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)機，建(jian)議每(mei)孔350µL，洗(xi)板(ban)5次（如手工洗(xi)，則每(mei)孔300µL，洗(xi)板(ban)3次）。試驗前，確定好樣(yang)品，質(zhi)控(kong)品的(de)加樣(yang)布局方案。取所(suo)需(xu)板(ban)條(tiao)置于板(ban)架上。

至少設

1孔（如A1）         空(kong)白對照

1孔 (如B1)          陰性(xing)質控

2孔 (如C1+D1）      臨界質控

1孔（如E1）         陽性質控(kong)

如覺得有必要，建議樣品和質控品都作雙份(fen)檢測。

試(shi)驗(yan)應按同(tong)樣的加(jia)樣順(shun)序加(jia)取試(shi)劑，避免不同(tong)的時(shi)間間隔造成誤差。

使用新(xin)的一次性加樣槍頭，加各質控品，樣品

調節(jie)恒溫箱(xiang)為37±1℃

• 加50µL質控品和稀釋樣品至相應各孔中，設(she)A1作為空(kong)白對照
• 封板紙蓋(gai)板
• 37 ± 1 ℃溫育1小時±5分鐘(zhong)
• 溫育后，移(yi)除封板紙，倒(dao)出微孔(kong)內液體(ti)，每孔(kong)用300µL稀釋(shi)洗(xi)滌(di)液，洗(xi)板3次，避(bi)免洗(xi)滌(di)液相(xiang)互(hu)溢濺(jian)至(zhi)其它(ta)微孔(kong)。每次洗(xi)板時，浸泡時間應(ying)大(da)于(yu)5秒。后，在吸水紙上拍干(gan)，去除殘留液滴。

注意：洗滌(di)步驟很(hen)關鍵。不(bu)充(chong)分(fen)的(de)洗板，會導致(zhi)不(bu)精確或錯誤上(shang)升的(de)吸光度值。

• 除空(kong)白(bai)對照孔（A1）外(wai)，加50µL蜱傳腦炎液抗原液至各(ge)孔(kong)，蓋板(ban)
• 室溫下溫育30分鐘(zhong)
• 重復步驟4
• 除空白對照(zhao)孔（A1）外(wai)，加50µL 蜱傳腦炎液抗(kang)體液至(zhi)各孔，蓋板
• 室溫下溫(wen)育30分(fen)鐘
• 重(zhong)復步驟4
• 除空白對照孔（A1）外(wai)，各加(jia)50µL鏈酶親和素酶聯物至(zhi)各(ge)孔，蓋(gai)板
• 室溫下(xia)溫育30分鐘(zhong)
• 重復步驟4
• 加100 µL TMB底(di)物液(ye)至各孔中
• 黑暗處(chu)，精確溫育15分鐘
• 按加(jia)TMB底物液的順序(xu)和速度(du)，加(jia)100 µL終止液至各(ge)孔中(zhong)。

藍色溶液在孵育過程中變為黃色。

注意(yi)：強陽性(xing)樣品會導(dao)致色(se)原產生(sheng)沉(chen)淀，沉(chen)淀的(de)產生(sheng)會對(dui)讀數產生(sheng)影響。所以(yi)先用(yong)陰性(xing)基(ji)質進行預稀(xi)釋，建議1：1的(de)比例稀(xi)釋，然后，再(zai)1個單位(wei)的(de)預稀(xi)釋樣品+100個單位(wei)的(de)樣品稀(xi)釋液。終結果(guo)（以(yi)U計算）乘(cheng)以(yi)預稀(xi)釋因(yin)子2即可

• 加入(ru)終止液后，30分鐘內，在酶標儀(yi)450/620 nm處讀數(shu)

【結(jie)果(guo)計算】

用(yong)A1空白對照孔對酶標(biao)儀(yi)進行調零

如遇技術(shu)問題，酶標儀(yi)不能(neng)調零。 所測樣(yang)品的(de)吸(xi)光度值減去空白對照的(de)讀數值，

即可(ke)得到較可(ke)靠的讀數(shu)。

在酶標(biao)儀處(chu)450 nm處(chu)測讀所有(you)質控品(pin)和樣品(pin)的吸光(guang)度值。620 nm作為(wei)參考波長。

如(ru)進行雙孔檢測，計算吸光度均值。

實驗有效(xiao)性標準

如試驗有效，必須滿足以下要求

·空白對照（A1）：      &nbsp;吸光度值<  0.100

·陰性質控（B1）： &nbsp;     吸光度(du)值(zhi)<  臨界(jie)讀數

·臨界質控（C1+D1）     吸光度值   0.150~1.300

·陽性(xing)質控(kong)（E1）        吸光度值(zhi)>  臨(lin)界讀數(shu)

如上述標準沒滿足，試(shi)驗(yan)視為無(wu)效，試(shi)驗(yan)應重(zhong)測。

結果計算

臨界讀數是雙(shuang)孔臨界質控的吸光度(du)均值(zhi)

示范： ;臨界(jie)吸(xi)光度(du)(du)值(zhi)0.39 +臨界(jie)吸(xi)光度(du)(du)值(zhi)0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即(ji)吸光度值＝0.38

結果分析說明

樣品吸光度(du)值(zhi)高(gao)于臨界讀(du)數的10 %視為(wei)陽性結果。

樣品吸光度值在(zai)臨界讀數(shu)的±10 %范圍內視為灰色可疑區

建議2－4周后，重新(xin)取新(xin)鮮的(de)樣品進(jin)行(xing)試驗。如試驗結果(guo)仍為灰色可疑區，視

為陰性結果

樣品吸光(guang)度(du)值低于臨界(jie)讀數的10%視為陰(yin)性(xing)結果

結果以U表示

病人(ren)吸光度均(jun)值×10  ;      

--―――――――  ＝ [Units=U]

臨(lin)界指數(shu)

示范(fan)： 1.216×10   

    ;   -------------   =32 U（Units）

&nbsp;        0.38

臨界：    10 U

灰區：    9-11 U

陰性(xing)：    <9 U

陽性：    >11 U

【注意事項】

• 試劑(ji)僅供體外(wai)診斷和專業人(ren)士使用。
• 在檢測(ce)開始之前，仔(zi)細和(he)完整的(de)(de)閱讀說明書(shu)，使(shi)用(yong)試劑盒提供(gong)的(de)(de)說明書(shu)的(de)(de)有效版本(ben)，確保(bao)所有的(de)(de)程序都清楚。
• 如果試(shi)劑盒(he)有破壞的(de)(de)請(qing)與(yu)IBL公司聯系或(huo)是提交您(nin)的(de)(de)投(tou)訴單，但自(zi)您(nin)拿到試(shi)劑盒(he)后遲不(bu)超過一(yi)個星期(qi)。在檢測時(shi)請(qing)不(bu)要使用受(shou)損的(de)(de)試(shi)劑，并妥善保管好以備(bei)投(tou)訴時(shi)使用。
• 按照批號和有效期，不要(yao)(yao)混(hun)合使用(yong)不同批號的(de)試劑(ji)，也不要(yao)(yao)使用(yong)過期的(de)試劑(ji)。
• 遵守實(shi)驗室優化(hua)管理規則和安全指南(nan)，穿實(shi)驗服，帶橡皮(pi)手套(tao)，有必要(yao)時請戴護(hu)目鏡(jing)。
• 這種試劑(ji)盒中(zhong)含(han)有(you)會傷害眼睛和皮膚的有(you)害試劑(ji)，請閱讀材(cai)料來源和標簽獲取詳(xiang)細信息。產品的材(cai)料安全數據能夠(gou)從IBL公司主頁上載可直接咨詢IBL公司獲取。
• 根據(ju)國(guo)家生物有(you)害物質及安全條例，所有(you)化學藥品和(he)準(zhun)備或使用過(guo)的(de)試劑都應當做(zuo)有(you)害物質進(jin)行處理。
• 避(bi)免(mian)接觸終止液，以免(mian)刺(ci)激或灼燒皮(pi)膚。
• 試劑(ji)盒中部(bu)分試劑(ji)含有疊*化(hua)鈉(na)作為防(fang)腐劑(ji)，一旦(dan)與皮膚(fu)或(huo)者眼睛發生(sheng)接觸，立即用(yong)大量(liang)清(qing)水沖洗. *氮化(hua)鈉(na)可(ke)能會(hui)與鉛(qian)和銅的(de)管道發生(sheng)反應，形成爆炸性的(de)金屬疊氮化(hua)物(wu)。當處理試劑(ji)時，使用(yong)大量(liang)水沖洗以防(fang)止疊氮化(hua)物(wu)的(de)形成。
• 試劑(ji)(ji)盒中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)所有(you)試劑(ji)(ji)包(bao)括檢測過的(de)(de)(de)人血清(qing)/血漿對HIV/II，HbsAg和(he)HCV都(dou)表現為陰(yin)性(xing)(xing)，但是試劑(ji)(ji)中(zhong)(zhong)會出現此類病(bing)毒（HIV/II，HbsAg和(he)HCV）或其他具有(you)感染性(xing)(xing)的(de)(de)(de)病(bing)原體(ti)的(de)(de)(de)可能性(xing)(xing)都(dou)不能*被排除(chu)。因此，所有(you)的(de)(de)(de)試劑(ji)(ji)在(zai)使用和(he)處理(li)的(de)(de)(de)過程中(zhong)(zhong)都(dou)應當(dang)作潛(qian)在(zai)生物有(you)害物質進行處理(li)。

操作注(zhu)意事項

1. 樣品的不合理(li)(li)處理(li)(li)及實驗操作(zuo)的任(ren)何改動都(dou)(dou)將影響實驗的結(jie)果。取樣體積、溫(wen)育時(shi)間、預處理(li)(li)步驟都(dou)(dou)必須(xu)嚴格按說明進行。只(zhi)能使用標準(zhun)取樣器(qi)和(he)標準(zhun)設(she)備(bei)。

2. 一旦實驗開始，所有的步(bu)驟都必須完整(zheng)的進行下(xia)去，不(bu)允許中(zhong)斷。在使(shi)用前，將所有試(shi)(shi)劑和(he)樣品都平衡至室溫(wen)（18-25℃），輕(qing)輕(qing)搖動液體試(shi)(shi)劑和(he)樣品，試(shi)(shi)劑混合過程中(zhong)要避免氣泡。

3. 避免(mian)污(wu)染試劑、取樣(yang)(yang)器、微(wei)孔/試管(guan)(guan)。加(jia)試劑和(he)樣(yang)(yang)本(ben)時，請使(shi)用(yong)新的(de)取樣(yang)(yang)吸頭。不要交換(huan)瓶蓋。蓋好不使(shi)用(yong)的(de)試劑。不要重復使(shi)用(yong)微(wei)孔/試管(guan)(guan)或者試劑。

4. 用(yong)定標儀對反應板進行校準。

5. 溫育時間會影響實(shi)驗(yan)結果。微孔(kong)加樣的(de)順(shun)序和時間都必(bi)須(xu)*。建議使用8孔(kong)微量(liang)取(qu)樣器給微孔(kong)加樣。

6. 微(wei)(wei)量板的清洗(xi)非常重要(yao)(yao)，微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)清洗(xi)不(bu)好將會(hui)形(xing)成錯誤(wu)的實驗結果。建議(yi)使用多孔(kong)(kong)(kong)取樣器或自(zi)動微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)清洗(xi)設備進行清洗(xi)。每次溫育(yu)間隔期間要(yao)(yao)避免微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)干燥(zao)。加洗(xi)滌液(ye)和吸液(ye)時要(yao)(yao)避免碰(peng)到包被(bei)孔(kong)(kong)(kong)。清洗(xi)和加試劑時都應特別小心(xin)。清洗(xi)時，在(zai)微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)精確的加入洗(xi)滌液(ye)緩沖液(ye)，同時確保微(wei)(wei)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)(zhong)無殘(can)渣。

7. 濕度會影響包被板，所以在未到達室溫時請勿打開包裝(zhuang)(zhuang)，未使(shi)用的包被板要(yao)重新密封于(yu)裝(zhuang)(zhuang)有干燥劑的包裝(zhuang)(zhuang)袋中。   

蜱傳腦炎病毒lgG抗(kang)體(ti)檢(jian)測試劑(ji)盒